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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

LysoTracker®系列探針是對活細(xì)胞中的酸性區(qū)室進(jìn)行選擇性染色的一類熒光染料， LysoTracker探針由一種連接一個(gè)弱堿基的熒光基團(tuán)組成，其中僅弱堿可部分提供質(zhì)子，以維持PH在中性值。這使LysoTracker®探針能自由無阻地滲透細(xì)胞膜，使其能夠標(biāo)記活細(xì)胞。一般聚集在球形細(xì)胞器上，適用于觀察溶酶體內(nèi)部生物合成及相關(guān)發(fā)病機(jī)理。該類探針具有幾大重要的特點(diǎn)，1）選擇性標(biāo)記酸性細(xì)胞器；2）納摩爾級（nM）濃度即可有效標(biāo)記活細(xì)胞；3）具有多色探針提供，可根據(jù)情況對樣品進(jìn)行多標(biāo)實(shí)驗(yàn)。Lysotracker中性pH下僅僅發(fā)生部分質(zhì)子化，因此該探針標(biāo)記細(xì)胞器的原理可能與其完全質(zhì)子化并滯留在細(xì)胞器膜上有關(guān)。探針對酸性細(xì)胞器有高選擇性，與二硝基苯 (DNP)不同， 溶酶體紅色熒光探針DND-99探針不需二抗來檢測。

warbio公司提供LysoTracker® Red DND-99為紅色熒光標(biāo)記的溶酶體探針，具有577/590 nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。本品以溶于無水DMSO的1 mM儲存液形式提供。

溶酶體紅色熒光探針DND-99可用于多種顏色熒光檢測。

步驟說明

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進(jìn)行簡短離心使 DMSO 溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將 1mM   儲存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度為 50-75nM ；

【注意】： 1 ）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。 2 ）若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會觀察到熒光信號的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。

2. 染色

2.1 對于貼壁細(xì)胞

1 ）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。

2 ）待細(xì)胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量 37 ℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。

3 ）利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時(shí)間。

2.2   對于懸浮細(xì)胞

1 ）離心，吸除上清。

2 ）利用 37 ℃預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。

3 ）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

4 ）置于熒光鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長染色時(shí)間。

【注意】：對于懸浮細(xì)胞，也可將細(xì)胞貼附于經(jīng) BD Cell-Tak 處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。注意事項(xiàng)

1）DMSO有毒，使用時(shí)請小心操作。

2）了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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