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酶是生物體非常重要的一類(lèi)蛋白質(zhì)，今天給大家介紹一款特色的DNA外切酶，以去除Fosmid等文庫(kù)純化過(guò)程中細(xì)菌基因組DNA的污染，一起來(lái)了解下吧~

在質(zhì)粒，粘粒和BAC克隆載體等載體DNA的制備過(guò)程中，使用堿裂解法會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌染色體DNA片段的污染。如果使用某些方法沒(méi)有有效的去除污染DNA，那么污染的DNA會(huì)連接入克隆載體導(dǎo)致假陽(yáng)性，高背景或錯(cuò)誤的測(cè)序結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法，如純化柱或氯化銫離心不能有效的去除這些污染，因此還需要進(jìn)一步的純化。而Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase可以選擇性的去除質(zhì)粒，粘粒和BAC克隆載體制備中污染的細(xì)菌染色體DNA（圖1）。因此，Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase是純化質(zhì)粒，粘粒和BAC克隆載體的理想選擇。 

1.在大規(guī)模質(zhì)粒，粘粒和BAC克隆載體制備中去除污染的細(xì)菌染色體DNA

2.消化線性DNA而不消化帶切口或閉環(huán)的dsDNA或超螺旋DNA（質(zhì)粒，fosmid等）

3.用作質(zhì)粒，粘粒，fosmid，BAC載體和克隆制備物的最終純化步驟

4.保護(hù)環(huán)狀dsDNA

泳道2：500ng的未被切割的質(zhì)粒DNA；

泳道4：Plasmid-Safe™ DNase處理后的染色體DNA和質(zhì)粒DNA混合物；

△圖2.消除產(chǎn)生白色菌落的線性DNA

3ug的EcoR I消化的細(xì)菌基因組DNA中加入2ug含有l(wèi)acZ的超螺旋質(zhì)粒載體。取一半混合物用Plasmid-Safe™ DNase處理；另一半不處理，作為對(duì)照。待Plasmid-Safe™ DNase熱滅活后，將DNA用EcoR I處理，然后用T4DNA連接酶連接過(guò)夜，并轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中，鋪至含有IPTG/X-gal培養(yǎng)基上。用Plasmid-SafeDNase處理的DNA，只有1-3％菌落呈白色，而對(duì)照DNA白色菌落數(shù)大于50％。利用Plasmid-Safe™ DNase能消除幾乎所有的線性DNA。